在细胞体外培养过程中，污染宛如潜藏的“隐形杀手”，时刻威胁着实验的准确性与稳定性。其中，支原体污染以高达30%-60%的比例，成为生物医药研究人员最棘手的问题之一。本文将全面解析支原体污染的防控策略，帮助您从容应对这一实验室的顽疾，确保细胞培养实验的顺利进行。

什么是支原体？

支原体（Mycoplasma），也称为霉形体，属于柔膜体纲（Mollicutes），是目前已知最小的原核生物之一。其结构由脂蛋白膜、核糖体和圆形双链DNA组成，基因组大小为580-2,200kb。支原体虽能在无生命培养基中生长，但其生物合成能力有限，必须依赖外源营养成分。细胞培养体系提供了适宜的生长环境，成为支原体繁殖的理想场所。此外，支原体能够长期附着于宿主细胞表面存活，并对多种常用抗生素具有耐药性，这埋下了潜在的污染隐患。

支原体污染的表现

自然界中支原体种类繁多，而在细胞培养中常见的污染菌株包括牛精氨酸支原体、发酵支原体、猪鼻支原体等。污染后，细胞会出现一系列特征性变化，包括：1、细胞生长速率异常；2、形态改变，贴壁性差；3、染色体数目或结构异常；4、细胞膜抗原性变化；5、代谢通路紊乱；6、细胞复苏后存活率降低。这些变化虽缺乏特异性，但却严重干扰正常生理状态，导致实验结果失真。由于支原体体积小且无细胞壁，通过常规光学显微镜难以识别，进一步增加了污染的检测和处理难度。因此，一旦发现细胞出现不明原因的生长或形态异常，应优先考虑支原体污染的可能。

支原体污染检测

准确检测是防治支原体污染的关键。目前常见的支原体检测方法包括观察法、培养法、免疫法、DNA荧光染色法和分子法等。其中，培养法和DNA荧光染色法是《药典》推荐的标准方法，但培养法周期较长，而qPCR被认为是灵敏度最高的快速检测方式。

支原体清除方法

在细胞培养过程中，一旦发现支原体污染，及时有效的清除至关重要。清除支原体的核心在于破坏其脂蛋白膜结构与抑制关键代谢途径。由于支原体与细胞在培养特性上的相似，如何有效清除支原体而不损害细胞活性，是一项巨大挑战。

1. 热处理法：支原体的耐受温度范围为35-37℃，将污染细胞置于41℃处理5-10小时（最长不超过18小时），能够有效杀灭支原体。但需注意不同细胞对高温的耐受性，需谨慎选用。

2. 抗生素法：支原体对部分抗生素如卡那霉素、庆大霉素等具有一定敏感性。将细胞培养在含抗生素的培养基中，并多次检测支原体为阴性，则可认为清除成功。但抗生素的过度使用可能诱发耐药或毒性反应，需谨慎操作。

3. 复合型支原体清除试剂：推荐使用复合型清除试剂，通常含有抗生素和穿透剂，可破坏支原体膜、干扰其代谢路径，抑制DNA复制，从而达到清除目的。推荐产品为尊龙凯时Anti-Myc支原体清除试剂，操作简便，效果显著，且对细胞的毒性较小，有助于保持细胞活性。

在清除支原体后，需通过qPCR、DNA荧光染色等方法确认支原体是否已完全清除，避免假阴性结果。

尽管支原体微小，但却是细胞培养中的重大污染源。唯有深入了解其特性，及时发现污染信号，掌握有效的检测与清除方法，才能真正维护细胞实验的可靠性与稳定性。以上是支原体污染防治的全攻略。更多生物医疗相关信息，请继续关注尊龙凯时的最新动态。