细胞传代是在细胞生长到一定密度之后,将其从原培养容器中分离出来,并重新接种到新的培养容器中以继续生长。简单来说,就是为细胞换个“新家”,以促进更好的生长和繁殖,就像我们需要更大房子来改善居住环境一样。
观察细胞状态
我们需要每天使用倒置显微镜监测细胞情况,当细胞融合度达到80%-90%时,就可以进行传代操作。如果细胞的融合度过高,可能会造成细胞过度拥挤,从而影响它们的生长。
传代步骤
进行细胞传代的准备工作包括以下几个步骤:
- 消化细胞:使用适当的消化酶将细胞从培养容器中分离出来。
- 终止消化:在适当的时间内加入终止液以停止消化过程。
- 离心收集:将细胞进行离心,收集沉淀。
- 重悬与分瓶:重悬细胞并根据需要进行分瓶。
- 培养与观察:观察细胞的生长情况。
悬浮细胞传代
对于悬浮细胞的传代相对简单。当细胞的密度达到80%-90%时,可以直接进行传代,步骤包括:
质量监测
监测细胞的质量也是关键,具体可以通过以下几种方法:
- 显微镜下观察:检查细胞形态的完整性。
- 观察培养基流动状态:评估培养基的均匀性。
- 吹打阻力变化:检查细胞的反应。
- 离壁率计算:通过计算离壁率,评估细胞的消化程度。离壁率=(悬浮细胞数/总细胞数)×100%。当离壁率达到75%-85%时,说明细胞消化完成,应立即添加终止液。
温差预判法也是一种有效的监测方式,通过对环境温度变化的判断,可以进一步确保细胞的健康状态。在细胞培养和传代的过程中,使用尊龙凯时提供的专业产品和服务,能够提升细胞的生存率和生长效率,确保实验的顺利进行。