尊龙凯时提供的人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书详述了细胞培养的条件与方法，确保研究的有效性和细胞的稳定性。

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10%胎牛血清 (FBS) + 1%青霉素/链霉素 (P/S)

传代方法：首次建议1:2的比例进行传代；一般每2天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基，并保留用于对比实验。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完整培养基。

二、细胞处理与培养

细胞收到后，待其恢复到良好状态后，填满完整培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精对细胞瓶进行消毒后，需在超净台内操作，确保严格无菌。细胞瓶应放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。

显微镜观察细胞的生长情况并拍照保存（建议使用40x、100x及200x倍率各拍一张）。前三天的照片为重要的售后参考依据，不提供照片则默认细胞接收状态良好。

传代时，建议其中一瓶使用原瓶的完整培养基，另一瓶使用自配培养基进行对比，换液后注意将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，则将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察消化情况，若细胞呈圆形并开始脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完整培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬加入1-2ml完整培养基。
4. 根据1:2的比例分瓶传代（将细胞分为两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液终止消化，然后轻轻打散细胞，转移至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转移至液氮罐中，须先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种于T25培养瓶，放入37℃、5%CO2的培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞在运输过程中可能因不牢固而脱落，属于正常现象。如脱落较多，可收集培养液于离心管中并进行1000RPM离心5分钟，将上清液用于过渡培养。随后加入胰酶1-2ml轻打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。最后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题的重发情形：
   • 运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，将予以重发。
   • 收到产品48小时内，出现污染问题请提供实验结果，经核实后重发。
   • 常温发货细胞静置24小时后死亡，干冰发货后24小时死亡，须提供细胞状态照片，经核实后重发。
   • 运输过程中污染，需提供实验结果，核实后重发。
   • 细胞活性问题需在7天内提供实验结果，检验细胞活力，如属实则重发。
   • 收到细胞后请在第一、二、三天拍照，三天内未告知视为产品合格。
2. 不予重发的情形：
   • 因客户原因造成细胞污染，不予重发。
   • 客户不当操作导致细胞状态不良，亦不予重发。
   • 使用非推荐培养体系导致细胞状态受损，不予重发。
   • 三天内未提供细胞状态照片，视为不符合重发条件。

如对实验细节有疑问，欢迎随时与尊龙凯时的技术团队联系，确保您获得最优质的支持与服务。