尊龙凯时人结肠腺癌细胞LS1034培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：1640培养基+10%胎牛血清(FBS)+1%青霉素/链霉素(P/S)

传代方法：初次建议按照1:2比例进行传代，传代后每2天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，应将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，需用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（建议每个倍数拍摄一张：40x, 100x, 200x）。前三天的照片是售后服务的重要依据，如未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml的完全培养基，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速提回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬1-2ml完全培养基。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变化，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，将沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如后期需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 次日，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，一些细胞可能会出现脱落现象，这属于正常情况。如脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，收集上清以作过渡培养。沉淀细胞后加入胰酶处理，并在消化1-2分钟后终止反应，再进行离心和重悬，按1:2比进行传代。

五、售后条款

1）细胞问题的重发情况

1. 运输途中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞如复苏后24小时未存活，需要提供细胞状态照片，可重发。
4. 出现污染的情况下，如细胞在规定时间内未开封，亦可重发。
5. 细胞活性问题需在接收后7天内报告，并使用台盼蓝检测细胞活力，一经核实则可重发。
6. 收货后的当天及第2、3天内请拍照反馈，未反馈则视为产品合格。

2）不予重发的情况

1. 由客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不佳者，不予重发。
3. 使用非推荐培养体系导致细胞状态问题的不予重发。
4. 未提供培养前3天照片的细胞状况不佳，不予重发。
5. 进行其它处理的细胞，不予重发。
6. 收到后2天内未反馈的不予重发。
7. 视具体情况处理。

选择尊龙凯时，为您的细胞培养提供保障，让科研之路更为顺畅。