尊龙凯时的胎牛血清建议在-20℃常规储存,若需长期保存则可在-80℃环境下冷冻。在解冻过程中,不宜将其直接放在常温(25-37℃)中,以避免产生絮状沉淀,这可能会对血清的质量造成影响。推荐的方法是先将血清从-20/-80℃转移到4℃进行解冻,待其完全融化为液体后,再将其转移至室温。在整个解冻过程中,需定期轻摇,以确保血清成分均匀混合,有助于降低沉淀的产生概率。
解冻后,您可以将血清分装于15mL或50mL无菌离心管中进行冻存。根据血清使用的频率,可以将一管解冻的血清存放在4℃中以便随时配制培养基。但需注意,在4℃中存放时间不宜过长,最好在一个月内使用完毕。解冻后的胎牛血清也不应在37℃或室温下存放过久,以防止关键细胞生长因子的失活,从而影响细胞的状态。
关于血清的添加量,通常不宜过多,一般添加量为5%、10%或20%。大部分细胞的标准培养使用10%的血清浓度,而部分细胞在原代提取时则使用20%的血清。具体哪种细胞适合的血清浓度应根据其特性和实验目的进行探索。
热灭活是一个重要的步骤,通常以56℃加热30分钟处理已解冻的血清,以去活化补体。补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩、肥大细胞及血小板组胺释放、吞噬作用增强以及淋巴细胞和巨噬细胞的趋化和激活。尽管如此,常规细胞培养并不总是需要热灭活,因为经过此步骤处理的血清对细胞的生长作用有限,甚至可能由于高温而降低血清质量,导致细胞生长速率降低及沉淀物增加。
在细胞培养过程中,可能会遇到需要更换血清的情况。如果直接用另一种血清配制的培养基,原本生长迅速的细胞可能会变得缓慢,甚至脱壁死亡。这通常是因为细胞习惯了原有的培养环境,换用新环境(即使是更高品质的血清)也可能导致适应不良。因此,在更换血清时,应遵循渐进式替换的方式,以帮助细胞逐步适应新的培养条件。推荐的替换比例是首次1:3,第二次1:1,第三次3:1,最后完全替换。对一些对培养体系敏感的细胞,还需进一步调整替换比例。
如果解冻后发现有少量乳白色的絮状或点状物质,这主要是血清中脂蛋白变性及解冻后纤维蛋白的结果,这些絮状物质不会影响血清质量。可以通过400×g离心5分钟取上清,通常不会对细胞产生较大影响。一般来说,厂家提供的血清都是无菌的,通常无需再进行过滤。如果发现血清中有悬浮物,可将其与培养液一同过滤,以避免直接过滤血清。
在细胞培养过程中,如发现黑点,首先应观察培养基是否混浊,黑点是否不规则游动。如果细胞被污染,微生物将大量繁殖,培养基会迅速变色和混浊。污染类型包括细菌和支原体等。如果在显微镜下观察到细胞状态良好,而黑点出现前后没有变化,那么黑点的出现可能与以下情况有关:(1)细胞自然破碎后的残骸;(2)血清中的杂蛋白,可能是由于反复冻融造成的;(3)培养基的水质或容器不合格。可以通过离心和过滤去除这些黑点;(4)原代细胞中出现的小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可去除。
尊龙凯时提供多种规格的胎牛血清,供科研伙伴选择,并完善售前和售后服务,是值得信赖的品牌。我们将不断努力为客户提供优质的产品和服务。