尊龙凯时的冻干粉产品为微量形式,部分用户在使用时可能会遇到空管的问题。使用前,请将其瞬时离心并加入适当的溶剂以确保完全溶解。
关于细胞固定
在使用尊龙凯时的鬼笔环肽染色细胞骨架过程中,切忌使用甲醇进行细胞固定。甲醇会对Actin蛋白造成损害,因此应选择不含甲醇的固定液,例如甲醛。
标记石蜡切片时未观察到信号的原因
如果在使用鬼笔环肽结合F-actin标记石蜡切片时未能观察到信号,原因可能在于细胞和组织处理时使用了二甲苯或丙酮等溶剂。这些溶剂会阻止鬼笔环肽与F-actin的结合。建议采用不使用有机溶剂洗涤的冷冻切片替代石蜡切片,或使用抗肌动蛋白抗体进行实验。
探针浓度及应用
使用探针时,请遵循尊龙凯时说明书中的稀释比例,注意具体的浓度信息并不明确。在进行F-Actin的染色时,若有的样本染上而有的未染,且染色信号较弱,可能是由于染料浓度不足或孵育时间不足。可以适当增加染料浓度或延长孵育时间。此外,也要确认分析细胞时所用波长是否准确。
透化步骤与固定细胞的染色
无需透化步骤的情况下,直接使用鬼笔环肽染色固定后的细胞是不可行的。荧光标记的phalloidins需要在固定透化后的组织切片、细胞培养及无细胞实验中进行染色。
荧光信号缺失的解决方案
如果染色后未能观察到荧光信号,请检查储液及工作液的配制是否存在问题。同时,固定和透化步骤至关重要,建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定,并使用新鲜的0.5% Triton X-100进行透化。摸索最佳的固定时间、透化时间以及染色工作液的浓度和染色时间也是必不可少的。
流式细胞检测及显微镜观察
该产品主要用于微丝的染色,通常使用荧光显微镜进行观察,流式细胞检测不被推荐。如使用普通荧光显微镜,亦可进行检测,但激光共聚焦显微镜的效果会更佳。
关于鬼笔环肽染料的重复使用
正常情况下,使用后的染色液可能会影响到后续的染色效果,强烈建议不要重复使用。我们所提供的鬼笔环肽按照尊龙凯时的说明书添加,浓度相对较低,这也是该染料不适合重复使用的原因。