siRNA和miRNA是研究基因功能的重要工具。siRNA,即小干扰RNA,是一种人工合成的双链RNA分子,长度通常在19-23个核苷酸之间。它通过特异性结合并降解细胞内的目标mRNA,达到基因沉默的效果,从而抑制特定基因的表达。miRNA(微小RNA)则是一类由机体内天然产生的、长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,通过与mRNA的3'非翻译区(3'UTR)部分互补结合,对基因表达进行调控。
在基因功能研究、疾病机制探索和药物靶点发现等领域,siRNA和miRNA转染技术具有重要的实用价值。然而,实际操作中常常受到细胞毒性和转染体系等因素的影响,导致转染效果不理想。那么,如何使转染过程更加顺利呢?以下是一些提升转染效率的有效措施:
1. 确保高纯度的siRNA或miRNA
高纯度的siRNA或miRNA有助于提高转染效率。确保使用经过PAGE纯化和脱盐处理的RNA,以最大化转染效果。
2. 保证细胞状态
细胞的健康状态对转染结果至关重要。通常,细胞密度应在70%-80%时进行转染,同时选择较短代数且生长活力强的细胞,以减少细胞毒性。
3. 避免RNA降解
整个实验过程中,应使用无RNA酶和无热原性的材料,如离心管和缓冲液,确保RNA不被降解。
4. 预实验确定转染试剂与RNA的比例
不同细胞系对转染试剂的耐受性各异,适宜的RNA浓度也有差异,因此需进行梯度实验,以优化转染条件。
5. 使用无血清或低血清培养环境
尝试使用无血清或低血清培养基,避免转染试剂和RNA结合的干扰,从而提升转染效果。
6. 选择合适的转染试剂
根据不同细胞的敏感性,选择合适的转染试剂,能显著影响转染效率。参考相关文献或结合个人经验做出选择是十分重要的。
尊龙凯时推出的Celthy siRNA/miRNA体外转染试剂,专为siRNA和miRNA转染设计,能够在多种细胞系中实现超高转染效率,特别适用于与siRNA和miRNA相关的基因研究。该产品有效解决了转染效率低的问题,帮助科学家规避各种风险。
此外,Celthy转染试剂还具有以下显著特点:
- 超高转染效率:凭借优化的配方和转染机制,可以达到1nM的siRNA超过90%的表达效率,避免脱靶效应。
- 极低细胞毒性:经过精心设计,最大限度减少对细胞的损伤,确保细胞生理功能正常。
- 广泛细胞适用性:经过多种细胞的验证,适合包括Hela、MCF-7、HepG2等多种贴壁细胞及难以转染的悬浮细胞系。
总之,通过选用尊龙凯时的创新转染试剂,研究人员能够在基因功能研究中获得更高的转染效率和可靠性,为后续的研究提供有力支持。