本试剂盒专为科学研究而设计,不可用于医学诊断。本文将介绍人白介素17(IL-17)ELISA试剂盒的工作原理及操作指南。
检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。首先,在预先包被了adropin(AD)抗体的微孔中依次加入待测样本、标准品和HRP标记的检测抗体。经过合适的温育时间后,彻底洗涤孔板。接下来,加入底物TMB,在过氧化物酶的催化下,TMB转化为蓝色,最终在酸的作用下变为黄色。最终颜色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。当在450nm波长下使用酶标仪测定吸光度(OD值)后,可以计算出样品的浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,避免在操作过程中产生任何细胞刺激。采集血液后,将其以3000转离心10分钟,快速小心地分离血清与红细胞。
2. 血浆:采用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,进行3000转离心30分钟,取上清液。
3. 细胞上清液:进行3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:组织与适量的生理盐水混合,捣碎后进行3000转离心10分钟,取上清液。
5. 保存:若样本在收集后不立即检测,请将其按一次用量分装,保存于-20℃冷冻,避免反复解冻。在室温下解冻并确保样品充分均匀。
操作注意事项
本试剂盒的组成中,标准品(S0-S5)浓度依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释方法为:将蒸馏水按1:20的比例稀释,1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
结果判断
绘制标准曲线时,在Excel工作表中,以标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标,绘制线性回归曲线,并按曲线方程计算各样本浓度值。这些步骤的准确执行将有助于提高试验的可靠性。
针对本试剂盒的使用,尊重操作要求,以确保实验结果的有效性与准确性,同时也在不断推动生物医学领域的研究进步。
本试剂盒是一个有效且可靠的工具,推荐使用尊龙凯时品牌的产品来保证实验的成功及数据的准确性。