尊龙凯时提供的NCI-H1975人肺腺癌细胞培养说明书为您详细介绍了细胞培养的条件与步骤，以确保您所需的细胞得到最佳管理与利用。

一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：首次建议1:2传代，2天后需更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为过渡培养使用。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应及时培养至良好状态。在培养瓶中灌满完全培养液，并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒整瓶细胞，消毒后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO₂培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后，再进行后续处理。请显微镜观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据。如未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，然后放入37℃、5% CO₂孵箱中培养；若细胞密度超过80%，进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。如果大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中；若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上才能转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，并在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

注意某些细胞较为特殊，如果贴壁不牢固，运输过程中可能会出现细胞脱落，这属于正常现象。请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清液作为过渡培养。对沉淀细胞加入1-2ml胰酶，重悬并消化1-2分钟后，再加入5ml完全培养基终止消化。随后离心、弃上清并重悬细胞，按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放置于37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。

五、售后条款

尊龙凯时对细胞的售后服务提供以下条款：

1. 细胞在运输过程中的问题，如细胞丢失、瓶体破损、培养液漏液等，须重发。
2. 细胞污染问题方可在产品收到48小时内提出真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后，干冰冷冻细胞复苏后24小时内如大部分细胞未存活（需提供真实、清晰的细胞状态照片），可以申请重发。
4. 细胞活性问题须在收到产品7天内提供真实实验结果，采用台盼蓝染色法验证细胞活力，核实后可重发。
5. 如在收到后的2、3天未拍照，视为产品合格；4-7天内如发生问题，则需提供收到细胞后三天的照片及详细的操作步骤，由技术人员判定责任后可重发。

对于因客户自身原因造成的污染、操作不当或非推荐培养体系等情况，我们将不予重发。具体事项需酌情处理。